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企業(yè)展示補(bǔ)體系統(tǒng)有三條主要途徑可以啟動(dòng)補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)：經(jīng)典途徑、旁路途徑和凝集素途徑，1. 經(jīng)典途徑（Classic Pathway），從C1q-C1r2-C1s2開(kāi)始，抗原-抗體復(fù)合物為主要激活物；2.旁路途徑（Alternative Pathway），從C3開(kāi)始，其不依賴于抗體；3.凝集素激活途徑（MBL Pathway），通過(guò)甘露聚糖結(jié)合凝集素（Mannan Binding Lectin, MBL）糖基識(shí)別。上述3條途徑具有共同的末端通路，即膜攻擊復(fù)合物的形成及其溶解細(xì)胞效應(yīng)。
圖1 補(bǔ)體激活的3條途徑
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補(bǔ)體系統(tǒng)概況
補(bǔ)體系統(tǒng)是先天免疫的重要組成部分，其異常激活或調(diào)控失衡可導(dǎo)致多種自身免疫性疾病和罕見(jiàn)病。有明確補(bǔ)體致病機(jī)制的疾病有陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥、非典型溶血性尿毒癥綜合征、干性年齡相關(guān)性黃斑變性等。截至 2025年，全球已獲批上市的靶向補(bǔ)體系統(tǒng)的藥物主要包括以下幾類：?jiǎn)慰寺】贵w、小分子拮抗劑、肽類抑制劑和RNA適配體，這些藥物主要作用于補(bǔ)體通路中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，如C3、C5、Factor B、MASP-2 等。
相較于上述藥物類型，小核酸藥物可通過(guò)靶向 mRNA 實(shí)現(xiàn)對(duì)補(bǔ)體關(guān)鍵因子（如 C3、C5、Factor B等）的源頭性、持久性沉默，具有給藥頻率低、組織分布可控、可靶向“不可成藥”蛋白等獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，正在成為補(bǔ)體靶向治療領(lǐng)域極具潛力的新方向。雖然目前尚無(wú)靶向補(bǔ)體系統(tǒng)的 ASO 或 siRNA 藥物獲批上市，但全球已有多個(gè)候選藥處于臨床開(kāi)發(fā)中。
在這一背景下，如何建立科學(xué)可靠的小核酸藥物藥效評(píng)價(jià)體系，成為推動(dòng)該領(lǐng)域臨床轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵。有濟(jì)醫(yī)藥藥效團(tuán)隊(duì)在小核酸靶向補(bǔ)體藥效評(píng)價(jià)中積累了豐富經(jīng)驗(yàn)，本文將結(jié)合團(tuán)隊(duì)經(jīng)驗(yàn)圍繞小核酸藥物在C3、C5、CFB靶點(diǎn)的藥效評(píng)價(jià)關(guān)鍵指標(biāo)展開(kāi)介紹。
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小核酸靶向補(bǔ)體藥效作用評(píng)價(jià)策略
PCC階段，采用人源化小鼠，考察藥物降低靶蛋白、敲降靶基因水平，起效時(shí)間，藥效持續(xù)時(shí)間，起效劑量等指標(biāo)，確認(rèn)候選化合物。
IND階段，采用食蟹猴進(jìn)一步考察藥物對(duì)靶蛋白降低水平、靶基因的敲降等藥效作用，同時(shí)考察藥物劑量相關(guān)性，持續(xù)作用時(shí)間，為臨床研究提供依據(jù)。
1.小核酸藥物對(duì)hC3小鼠及食蟹猴藥效作用研究
采用hC3小鼠，通過(guò)單次皮下注射給予小核酸藥物，藥后7 d小鼠血清中hC3蛋白水平顯著下降（P<0.001），并可維持到藥后28 d。隨著小鼠周齡增加，生理鹽水組hC3小鼠體重增長(zhǎng)緩慢；給藥組小鼠體重呈穩(wěn)定增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)，在試驗(yàn)終點(diǎn)與生理鹽水組小鼠相比體重顯著增加（P<0.05）。需要注意的是，hC3小鼠自身會(huì)有一定死亡率，在14周齡時(shí)生存率約為50%，因此在開(kāi)展試驗(yàn)時(shí)盡量選擇在小鼠6周齡時(shí)開(kāi)始給藥，最長(zhǎng)可觀察至小鼠給藥后5周。
食蟹猴單次皮下注射小核酸藥物后，每7 d采血檢測(cè)猴血清中C3蛋白水平，并在藥后28 d進(jìn)行肝臟穿刺，檢測(cè)肝臟組織中C3 mRNA水平。結(jié)果顯示，給予小核酸藥物后C3蛋白水平及mRNA水平均極顯著下降，并可維持較長(zhǎng)時(shí)間，如圖2。
圖2 小核酸藥物對(duì)hC3小鼠及食蟹猴藥效作用研究
2.小核酸藥物對(duì)hC5小鼠及食蟹猴藥效作用研究
與hC3小鼠相比，hC5小鼠死亡率很低，從小鼠6周齡開(kāi)始給藥后可觀察較長(zhǎng)時(shí)間。向hC5小鼠單次皮下注射小核酸藥物后，小鼠血清中hC5蛋白水平顯著下降（P<0.001），抑制率最高可達(dá)99%，其藥效作用可在藥后35 d內(nèi)呈穩(wěn)定趨勢(shì)，隨后小幅度緩慢回升。
向食蟹猴單次皮下注射小核酸藥物后，結(jié)果顯示C5蛋白水平及mRNA水平均極顯著下降（P<0.001），抑制率最高可達(dá)95%，如圖3。
圖3 小核酸藥物對(duì)hC5小鼠及食蟹猴藥效作用研究
3.核酸藥物對(duì)hCFB小鼠及食蟹猴藥效作用研究
hCFB小鼠與hC3小鼠一樣，隨著周齡增長(zhǎng)，自身會(huì)有一定死亡率。因此在開(kāi)展試驗(yàn)時(shí)盡量選擇在小鼠6周齡時(shí)開(kāi)始給藥。
通過(guò)向hCFB小鼠單次皮下注射小核酸藥物發(fā)現(xiàn)，藥后7 d小鼠血清中hCFB蛋白水平顯著下降（P<0.001），并可維持到藥后49d。
食蟹猴單次皮下注射小核酸藥物后，每7 d采血檢測(cè)猴血清中CFB蛋白水平，并在藥后35 d進(jìn)行肝臟穿刺，檢測(cè)肝臟組織中CFB mRNA水平。結(jié)果顯示，給予小核酸藥物后CFB蛋白水平及mRNA水平均極顯著下降，并可維持較長(zhǎng)時(shí)間，如圖4。
圖4 小核酸藥物對(duì)hCFB小鼠及食蟹猴藥效作用研究
在檢測(cè)完小核酸藥物對(duì)靶蛋白和靶基因的藥效作用后，還需要對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)疾病的藥效指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，主要的檢測(cè)指標(biāo)包括：CH50、AH50、CCP、CAP。
4.CH50、AH50活性檢測(cè)
補(bǔ)體 CH50 和 AH50 活性檢測(cè)是評(píng)估補(bǔ)體系統(tǒng)整體功能的經(jīng)典功能性實(shí)驗(yàn)，它們分別反映經(jīng)典途徑（Classical Pathway）和旁路途徑（Alternative Pathway）的完整性。在補(bǔ)體靶向藥物開(kāi)發(fā)中，CH50 和 AH50是關(guān)鍵藥效學(xué)生物標(biāo)志物，用于確認(rèn)通路抑制程度，經(jīng)典途徑法(CH50)是基于在Ca2+和Mg2+存在下裂解致敏綿羊紅細(xì)胞。旁路途徑法(AH50)是基于在Mg2+存在下裂解兔紅細(xì)胞。C5靶點(diǎn)抑制劑主要通過(guò)經(jīng)典途徑作用，降低CH50活性，CFB靶點(diǎn)抑制劑主要通過(guò)旁路途徑作用，降低AH50活性。C3靶點(diǎn)抑制劑可降低CH50活性及AH50活性，但降低AH50活性程度更強(qiáng)。如圖5。
圖5 CH50、AH50活性檢測(cè)
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結(jié)語(yǔ)
目前在臨床階段的部分小核酸藥物已在 IgA 腎病、年齡相關(guān)性黃斑變性等補(bǔ)體驅(qū)動(dòng)疾病中顯示出顯著降低蛋白尿或延緩視網(wǎng)膜病變進(jìn)展的潛力。隨著遞送技術(shù)（如肝外靶向、腎臟/眼部局部遞送）和化學(xué)修飾（提高穩(wěn)定性、降低免疫原性）的持續(xù)突破，小核酸藥物有望從當(dāng)前以肝臟為靶器官的局限中拓展至更廣泛的補(bǔ)體介導(dǎo)疾病場(chǎng)景，包括 C3 腎小球病、非典型溶血性尿毒癥綜合征（aHUS）等。未來(lái)，結(jié)合精準(zhǔn)生物標(biāo)志物指導(dǎo)的個(gè)體化治療，小核酸療法或?qū)檠a(bǔ)體相關(guān)罕見(jiàn)病和自身免疫病提供高效、安全且長(zhǎng)期可控的新一代治療選擇。
經(jīng)過(guò)多年深耕，有濟(jì)醫(yī)藥小核酸藥效團(tuán)隊(duì)已經(jīng)積累了豐富的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)。目前，團(tuán)隊(duì)已成功開(kāi)展了20多個(gè)靶點(diǎn)的藥效學(xué)研究工作，并將其中6款產(chǎn)品順利推動(dòng)進(jìn)入臨床階段。我們期待與更多創(chuàng)新藥企及科研機(jī)構(gòu)攜手，共同推進(jìn)靶向補(bǔ)體系統(tǒng)的小核酸藥物研發(fā)，加速候選分子從藥效驗(yàn)證到臨床申報(bào)的進(jìn)程，助力突破性療法早日惠及患者。
